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ELISA檢測試劑盒實驗條件的選擇

釋出時間↟·•··: 2020-03-13  點選次數↟·•··: 1379次
   Elisa生物試驗是一種敏感性高▩☁•,特異性強▩☁•,重複性好的實驗診斷方法☁↟•。由於其試劑穩定◕✘╃₪╃、易儲存▩☁•,操作簡便▩☁•,結果判斷較客觀等因素▩☁•,已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中☁↟•。ELISA檢測試劑盒適用於體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒IgM抗體ELISA檢測☁↟•。
  在ELISA中▩☁•,進行各項實驗條件的選擇是很重要的▩☁•,其中包括:
  (1)包被抗體(或抗原)的選擇↟·•··:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時▩☁•,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間☁↟•。吸附溫度▩☁•,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時☁↟•。蛋白質包被的適濃度需進行滴定↟·•··:即用不同的蛋白質濃度(0.1◕✘╃₪╃、1.0和10μg/ml等)進行包被後▩☁•,在其它試驗條件相同時▩☁•,觀察陽性標本的OD值☁↟•。選擇OD值大而蛋白量少的濃度☁↟•。對於多數蛋白質來說通常為1~10μg/ml☁↟•。
  (2)固相載體的選擇↟·•··:許多物質可作為固相載體▩☁•,如聚氯乙烯◕✘╃₪╃、聚苯乙烯◕✘╃₪╃、聚丙醯胺和纖維素等☁↟•。其形式可以是凹孔平板◕✘╃₪╃、試管◕✘╃₪╃、珠粒等☁↟•。常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板☁↟•。不管何種載體▩☁•,在使用前均可進行篩選↟·•··:用等量抗原包被▩☁•,在同一實驗條件下進行反應▩☁•,觀察其顯色反應是否均一性▩☁•,據此判明其吸附效能是否良好☁↟•。
  (3)酶的底物及供氫體的選擇↟·•··:對供氫體的選擇要求是價廉◕✘╃₪╃、安全◕✘╃₪╃、有明顯地顯色反應▩☁•,而本身無色☁↟•。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用▩☁•,應注意防護☁↟•。有條件者應使用不致癌◕✘╃₪╃、靈敏度高的供氫體▩☁•,如TMB和ABTS是較為滿意的供氫體☁↟•。底物作用一段時間後▩☁•,應加入強酸或強鹼以終止反應☁↟•。通常底物作用時間▩☁•,以10-30分鐘為宜☁↟•。底物使用液必須新鮮配製▩☁•,尤其是H2O2在臨用前加入☁↟•。
  (4)酶標記抗體工作濃度的選擇↟·•··:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)☁↟•。然後再固定其它條件或採取“方陣法”(包被物◕✘╃₪╃、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統裡準確地滴定其工作濃度☁↟•。
  ELISA檢測試劑盒實驗禁忌↟·•··:
  1◕✘╃₪╃、濃洗滌液可能會有結晶析出▩☁•,試劑盒稀釋時可在水浴中加溫助溶▩☁•,洗滌時不影響結果☁↟•。
  2◕✘╃₪╃、本試劑不同批號組分不得混用☁↟•。顯色劑B請避光儲存☁↟•。
  3◕✘╃₪╃、如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大於標準品孔第1孔的OD值)▩☁•,請先將樣本稀釋一定倍數(n倍)後再測定▩☁•,計算時請zui後乘以稀釋倍數(×5×n)☁↟•。
  4◕✘╃₪╃、封板膜只限一次性使用▩☁•,以避免交叉汙染☁↟•。
  5◕✘╃₪╃、嚴格按照說明書的操縱進行▩☁•,試劑盒試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  6◕✘╃₪╃、從冷躲環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘後方可使用▩☁•,酶標包被板開封后如未用完▩☁•,板條應裝進密封袋中儲存☁↟•。
  7◕✘╃₪╃、所有樣品▩☁•,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理☁↟•。
  8◕✘╃₪╃、各步加樣均應使用加樣器▩☁•,並經常校對其正確性▩☁•,以避免試驗誤差☁↟•。一次加樣時間控制在5分鐘內▩☁•,如標本數目多▩☁•,推薦使用排槍加樣☁↟•。
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